ການກວດຫາອາຊິດນິວຄລີອິກຂອງໄວຣັດ

ລໍາດັບ genomic ຂອງໄວຣັສສ່ວນໃຫຍ່ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກ.ການສຳຫຼວດອາຊິດນິວຄລີອິກ ເຊິ່ງເປັນສ່ວນສັ້ນຂອງ DNA ທີ່ອອກແບບມາເພື່ອປະສົມກັບສ່ວນປະສົມຂອງ DNA ຫຼື RNA ຂອງໄວຣັສ.ປະຕິກິລິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ໂພລີເມີເຣສ (PCR) ແມ່ນເຕັກນິກທີ່ມີປະສິດທິພາບກວ່າໃນການກວດຫາໄວຣັດ.ວິທີການວິນິດໄສທີ່ມີຄວາມໄວສູງໄດ້ຖືກພັດທະນາບໍ່ດົນມານີ້.

A. ເຕັກນິກການປະສົມອາຊິດນິວຄລີອິກ

ການປະສົມຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກ, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນລວມທັງການ blotting ພາກໃຕ້ (ພາກໃຕ້) ແລະ blotting ເຫນືອ (ພາກເຫນືອ), ເປັນເຕັກນິກໃຫມ່ທີ່ພັດທະນາໄວໃນຂົງເຂດການວິນິດໄສໄວຣັດ.ເຫດຜົນຂອງການວິເຄາະການປະສົມແມ່ນການນໍາໃຊ້ສ່ວນສັ້ນຂອງ DNA (ເອີ້ນວ່າ "probe") ທີ່ຖືກອອກແບບເພື່ອປະສົມກັບສ່ວນ DNA ຂອງໄວຣັດຫຼື RNA.ໂດຍການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຫຼືການປິ່ນປົວເປັນດ່າງ, DNA ຫຼື RNA ເປົ້າຫມາຍສອງສາຍຖືກແຍກອອກເປັນສາຍດຽວແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກ immobilized ໃນການສະຫນັບສະຫນູນແຂງ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, probe ໄດ້ຖືກເພີ່ມແລະປະສົມກັບ DNA ຫຼື RNA ເປົ້າຫມາຍ.ຍ້ອນວ່າການສືບສວນຖືກຕິດສະຫຼາກດ້ວຍໄອໂຊໂທບຫຼືນິວເຄລຍທີ່ບໍ່ແມ່ນ radioactive, DNA ຫຼື RNA ເປົ້າຫມາຍສາມາດຖືກກວດພົບໂດຍຜ່ານ autoradiography ຫຼືໂດຍລະບົບ biotin-avidin .ເນື່ອງຈາກ genomes ໄວຣັສສ່ວນໃຫຍ່ໄດ້ຖືກໂຄນແລະຈັດລໍາດັບ, ພວກມັນສາມາດກວດພົບໄດ້ໂດຍໃຊ້ລໍາດັບສະເພາະເຊື້ອໄວຣັສເປັນ probes ໃນຕົວຢ່າງ.ໃນປັດຈຸບັນ, ວິທີການປະສົມປະກອບມີ: ຈຸດ blot , in situ hybridization ໃນຈຸລັງ, DNA blotting (DNA) ( blot ພາກໃຕ້) ແລະ RNA blotting (RNA) (ພາກເຫນືອ blot).

ເຕັກໂນໂລຊີ B.PCR

ໃນຊຸມປີມໍ່ໆມານີ້, ຊຸດຂອງເຕັກນິກການຂະຫຍາຍອາຊິດນິວຄລີອິກໃນ vitro ໄດ້ຖືກພັດທະນາໂດຍອີງໃສ່ PCR, ເພື່ອທົດສອບເຊື້ອໄວຣັສທີ່ບໍ່ມີຄວາມຮູ້ສຶກຫຼືບໍ່ສາມາດປູກຝັງໄດ້.PCR ແມ່ນວິທີການທີ່ສາມາດສັງເຄາະລໍາດັບ DNA ສະເພາະໂດຍປະຕິກິລິຢາ polymerase ໃນ vitro.ຂະບວນການຂອງ PCR ປະກອບມີວົງຈອນຄວາມຮ້ອນຂອງສາມຂັ້ນຕອນ: denaturation , annealing , ແລະການຂະຫຍາຍຢູ່ໃນອຸນຫະພູມສູງ (93℃ ~ 95℃), DNA double-stranded ແຍກອອກເປັນສອງສາຍ DNA ດຽວ;ຫຼັງ​ຈາກ​ນັ້ນ​ຢູ່​ທີ່​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຕ​່​ໍ​າ (37℃ ~ 60℃​)​, ສອງ primers nucleotide ສັງ​ເຄາະ anneal ກັບ​ສ່ວນ DNA ທີ່​ສົມ​ບູນ​ແບບ​;ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບ enzyme Taq (72 ℃), ການສັງເຄາະຂອງຕ່ອງໂສ້ DNA ໃຫມ່ເລີ່ມຕົ້ນຈາກ primer 3'end ໂດຍໃຊ້ DNA ເສີມເປັນແມ່ແບບແລະ nucleotides ດຽວເປັນວັດສະດຸ.ດັ່ງນັ້ນ, ຫຼັງຈາກແຕ່ລະວົງຈອນ, ສາຍຕ່ອງໂສ້ DNA ຫນຶ່ງສາມາດຂະຫຍາຍອອກເປັນສອງຕ່ອງໂສ້.ການເຮັດຊ້ໍາຂະບວນການນີ້, ແຕ່ລະລະບົບຕ່ອງໂສ້ DNA ທີ່ສັງເຄາະໃນຫນຶ່ງວົງຈອນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບໃນວົງຈອນຕໍ່ໄປ, ແລະຈໍານວນຂອງຕ່ອງໂສ້ DNA ແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນສອງເທົ່າໃນແຕ່ລະຮອບ, ຊຶ່ງຫມາຍຄວາມວ່າການຜະລິດ PCR ແມ່ນຂະຫຍາຍຢູ່ໃນຄວາມໄວຂອງບັນທຶກ 2n.ຫຼັງຈາກ 25 ຫາ 30 ຮອບ, ການຜະລິດ PCR ໄດ້ຖືກລະບຸໂດຍຜ່ານ electrophoresis, ແລະຜະລິດຕະພັນ DNA ສະເພາະສາມາດສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ແສງ UV (254nm).ສໍາລັບປະໂຍດຂອງຄວາມສະເພາະ, ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ແລະຄວາມສະດວກສະບາຍ, PCR ໄດ້ຖືກຮັບຮອງເອົາໃນການວິນິດໄສທາງດ້ານການຊ່ວຍຂອງການຕິດເຊື້ອໄວຣັດຈໍານວນຫຼາຍເຊັ່ນ: HCV, HIV, CMV, ແລະ HPV.ເນື່ອງຈາກ PCR ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍ, ມັນສາມາດກວດພົບ DNA ໄວຣັດໃນລະດັບ fg, ການປະຕິບັດງານຄວນໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຢ່າງລະມັດລະວັງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.ນອກຈາກນັ້ນ, ຜົນໄດ້ຮັບໃນທາງບວກໃນການທົດສອບອາຊິດ nucleic ບໍ່ໄດ້ຫມາຍຄວາມວ່າມີເຊື້ອໄວຣັສທີ່ຕິດເຊື້ອຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ.

ດ້ວຍການນໍາໃຊ້ເຕັກນິກ PCR ຢ່າງກວ້າງຂວາງ, ເຕັກນິກແລະວິທີການໃຫມ່ໄດ້ຖືກພັດທະນາໂດຍອີງໃສ່ເຕັກນິກ PCR ສໍາລັບຈຸດປະສົງການທົດສອບທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, PCR ປະລິມານທີ່ແທ້ຈິງສາມາດກວດພົບການໂຫຼດໄວຣັສ;ຢູ່ໃນສະຖານທີ່ PCR ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດການຕິດເຊື້ອໄວຣັດໃນເນື້ອເຍື່ອຫຼືຈຸລັງ;PCR ຮັງສາມາດເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງ PCR.ໃນບັນດາພວກເຂົາ, PCR ປະລິມານທີ່ແທ້ຈິງໄດ້ຖືກພັດທະນາຢ່າງໄວວາ.ເຕັກນິກໃຫມ່ຈໍານວນຫຼາຍ, ເຊັ່ນ TaqMan hydrolysis probe, hybridization probe, ແລະ molecular beacon probe, ໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັບເຕັກນິກ PCR ປະລິມານທີ່ໃຊ້ເວລາທີ່ແທ້ຈິງ, ເຊິ່ງຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານການຊ່ວຍ.ນອກຈາກການກໍານົດການໂຫຼດໄວຣັສໃນນ້ໍາໃນຮ່າງກາຍຂອງຄົນເຈັບຢ່າງຖືກຕ້ອງ, ວິທີການນີ້ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດຫາ mutant ທົນທານຕໍ່ຢາເສບຕິດ.ດັ່ງນັ້ນ, PCR ປະລິມານທີ່ແທ້ຈິງແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ຕົ້ນຕໍໃນການປະເມີນຜົນກະທົບ curative ແລະການເຝົ້າລະວັງຄວາມທົນທານຕໍ່ຢາ.

C. ການກວດຫາອາຊິດນິວຄລີອິກຂອງໄວຣັສທີ່ມີຄວາມໄວສູງ

ເພື່ອຕອບສະຫນອງຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການວິນິດໄສໄວຂອງພະຍາດຕິດແປດທີ່ເກີດຂື້ນໃຫມ່, ວິທີການກວດຫາທີ່ຜ່ານຄວາມໄວສູງ, ເຊັ່ນ DNA chips (DNA), ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ.ສໍາລັບຊິບ DNA, probes ສະເພາະແມ່ນໄດ້ຖືກສັງເຄາະແລະຕິດກັບຊິບຊິລິໂຄນຂະຫນາດນ້ອຍທີ່ມີຄວາມຫນາແຫນ້ນສູງເພື່ອສ້າງເປັນ DNA probe microarray (DNA) ເຊິ່ງສາມາດປະສົມກັບຕົວຢ່າງ.ສັນຍານຂອງການປະສົມສາມາດຖືກຮູບພາບໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ confocal ຫຼືເຄື່ອງສະແກນເລເຊີແລະໄດ້ຮັບການປຸງແຕ່ງຕື່ມອີກໂດຍຄອມພິວເຕີແລະຊຸດຂໍ້ມູນຂະຫນາດໃຫຍ່ກ່ຽວກັບພັນທຸກໍາທີ່ແຕກຕ່າງກັນສາມາດໄດ້ຮັບ.ມີສອງປະເພດຂອງຊິບ DNA."ຊິບສັງເຄາະ" ມີດັ່ງນີ້: oligonucleotides ສະເພາະແມ່ນຖືກສັງເຄາະໂດຍກົງໃສ່ຊິບ.ອີກອັນຫນຶ່ງແມ່ນ chip pool DNA.genes cloned ຫຼືຜະລິດຕະພັນ PCR ຖືກພິມອອກເປັນລະບຽບຢູ່ໃນສະໄລ້.ປະໂຫຍດຂອງເທກໂນໂລຍີຊິບ DNA ແມ່ນການກວດພົບພ້ອມໆກັນຂອງລໍາດັບ DNA ຈໍານວນຫລາຍ.ຊິບກວດຫາເຊື້ອພະຍາດລຸ້ນຫຼ້າສຸດສາມາດລະບຸໄວຣັສຂອງມະນຸດໄດ້ຫຼາຍກວ່າ 1700 ໂຕໃນເວລາດຽວກັນ.ເທກໂນໂລຍີຊິບ DNA ໄດ້ແກ້ໄຂບັນຫາຂອງວິທີການປະສົມອາຊິດນິວຄລີອິກແບບດັ້ງເດີມແລະມີການນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການວິນິດໄສໄວຣັດແລະການສຶກສາການລະບາດ.